2022-11-02
01、概述
伏马菌素 (Fumonisin FB) 是一种霉菌毒素,是由串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme Sheld)产生的水溶性代谢产物,是一类由不同的多氢醇和丙三羧酸组成的结构类似的双酯化合物。伏马菌素主要污染粮食及其制品,并对某些家畜产生急性毒性及潜在的致癌性,有报道指出,伏马菌素主要损害肝肾功能,能引起马脑白质软化症和猪肺水肿等,并与我国和南非部分地区高发的食道癌有关,现已引起世界范围的广泛注意。已成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。
2024欧洲杯买球app新推出伏马毒素(B1/B2/B3)免疫亲和柱,适合于和HPLC或LC-MS结合使用,定量检测FB1、FB2和FB3。适用于粮谷、饲料等样本中的伏马毒素净化处理,提高了样品的纯度,纯化后的提取液可用于不同的分析方法测定。
02、原理
净化的基础是抗原抗体反应,伏马毒素单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上,样品中的伏马毒素经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢通过伏马毒素免疫亲和柱,在免疫亲和柱内,伏马毒素与抗体结合,洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。Z后采用甲醇-乙酸洗脱伏马毒素,然后进行相关分析。
03、净化步骤
1)准确称取20g(精确至0.01g)粉碎的样品;
2)先加入50mL样品提取液混合,摇床振荡提取30min,于4000r/min,离心5min,取出上清液于试剂瓶中;
3)将底部沉淀部分再加入50mL样品提取液混合,以摇床振荡提取30min,于4000r/min,离心5min,取出上清液,与前面的上清液合并混匀;
4)准确移取10mL上清液,加入40mL 1.5%吐温20-PBS稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,至滤液澄清,备用。
5)准确移取15mL混匀滤液(相当于0.6g样品)过亲和柱。
6)3mL柱管上方堵头直接连接20mL针筒固定后使用(柱管内偶见有小气泡属正常现象,不影响亲和柱的使用);
7)准确移取上述混匀滤液,注入注射器中,调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱;
8)先用10mL PBS冲洗柱子,再用3mL水冲洗柱子,弃去流出液,流速1秒/滴,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体;
9)准确加入3.0mL洗脱液洗脱,流速自然重力,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液,进行相关测定。
(注意:整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!)
04、色谱条件
流动相配置 流动相A :移取0.2mL 甲酸,加水至200mL混匀,经0.22μm滤膜抽滤,即得; 流动相B:分别移取200mL色谱级乙腈和甲醇,混匀,经0.22μm滤膜抽滤,即得。 质谱条件 离子源:ESI; 检测方式:MRM; 干燥气:氮气,450℃; 流速:1000L/Hr; 碰撞气:氩气; 离子喷雾电压:1.0kV。
05、谱图展示
06、结果展示
【 产品信息 】