2022-09-23
在色谱柱使用过程中,会出现柱压高,峰形差等现象,其主要原因是色谱柱填料污染导致的,下面将对色谱柱填料污染进行原因剖析及解决方案。
填料污染的原因剖析
1)中药类样品成分复杂,如前处理过于简单,就很容易引起强保留成分积留在色谱柱入口端,导致色谱柱压力升高,柱效下降,峰型异常,或在色谱图中出现“鬼峰”。
2)蛋白类样品累积:生物类样品易在柱头端累积,导致柱压升高,柱效下降。
3)其他:如胶状,絮状等样品通过过滤无法去除,也会积压在筛板和柱头端,引起柱压升高。
解决方案
中药等成分复杂的样品
1)在方法开发时,就尽量采用SPE小柱、萃取等方法尽量多去除一些杂质。
2)使用保护柱,需要注意的是,保护柱的柱芯为耗材,不能长期使用不更换,一旦超过柱芯的保护能力,强保留物质还是会进入色谱柱,因此,要关注柱压,柱压提高10%以上就建议更换柱芯。
3)对于检测中药复杂成分的柱子,建议定期按色谱柱说明书的异常再生方法进行色谱柱维护,目的是定期的去用洗脱能力较强的乙腈,异丙醇去反向冲洗色谱柱,去除柱头端的强保留物质。
4)如检测这类产品的色谱柱出现超压,柱效不符合等情况,建议客户先按说明书的异常再生方法进行处理。如还是不能解决,再按公司的有关规定,申请维修。
蛋白类样品累积
1)使用SPE等更加有效的前处理方法。
2)定期进行色谱柱维护冲洗,推荐去除蛋白溶剂(乙腈-水-三氟乙酸 = 50-50-0.1)。
3)使用保护柱。
4)因这类原因,柱子一旦出现柱压升高,柱效下降的情况,维修后能恢复的可能性很小,所以建议客户在使用过程中去定期维护,并加保护柱。
其它
如胶状,絮状等样品通过过滤无法去除,也会积压在筛板和柱头端,引起柱压升高。这一类,更好在样品处理或工艺上去解决。