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葡聚糖凝胶LH-20,天然产物精细纯化的得力助手

2020-08-10

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图|蛋白纯化填料

天然产物是指从动物、植物及微生物中分离出来的生物二次代谢产物,自从发现来自天然界的有机化合物具有特殊的生理活性后,已经开发出许多具有治疗和保健作用的药物。

由于天然产物往往含有结构、性质不同的多种成分,且有效成分的含量一般较低。为了研究和开发天然产物,就要选择合适的层析填料,从复杂的中草药组成成分中提取、分离出有活性的单体纯成分。

 产品介绍

葡聚糖凝胶LH-20通过葡聚糖凝胶 G-25的羟丙基化制备,并且专门适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子,天然产物在有机溶剂中的纯化,例如类固醇,萜类化合物,脂质和低分子量肽。

 产品参数

产品

Tandex  LH-20

干粉粒径

30-120µm

排阻限(球蛋白)

<5kDa

pH稳定性

2-13(短时间,在位清洗)

更大流速

700cm/h

操作压力

≤0.3MPa

贮存温度

避光,干燥,4-30℃

葡聚糖凝胶 LH-20 的使用方法

将干粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分搅拌),洗去可能存在的残留物,抽干然后湿态不间隙装柱,jue对不能出现凝胶断层(否则要重新装柱),动态用一倍柱体积的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗净乙醇即根据自己选用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止,如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质,并根据性质确定柱高。如使用相同的溶剂,在以后的层析中柱平衡可以省略。

葡聚糖凝胶 LH-20 洗脱溶剂

葡聚糖凝胶 LH-20 洗脱溶剂分为两类:反相和正相两种。用得更多的是反相溶剂洗脱,以甲醇——水系统更为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,更后用 100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿——甲醇更为常见,先用 50%氯仿——甲醇,逐渐增加甲醇比例,更后用 100%甲醇冲柱。

样品的处理和洗脱溶剂的选择

如果样品极性大,选用反相溶剂洗脱(甲醇——水),样品用更少体积的甲醇——水(尽可能甲醇少一些)溶解,过滤后,湿法上样(必须要进行过滤!否则把葡聚糖凝胶 LH-20 堵塞,就必须将葡聚糖凝胶 LH-20 的柱头部分弃去, 造成不必要的浪费) 。如果样品极性小, 这选用正相溶剂洗脱 (氯仿——甲醇) ,样品用更少体积的氯仿——甲醇溶解,过滤后,湿法上样。

葡聚糖凝胶LH-20的分离技巧

(1)流速要控制好,流速不可太快,为了快加压,分子筛效果会降低:过慢会导致样品在柱子扩散严重,达不到分离效果。

(2)柱子尽可能长,Tandex LH-20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。

(3)馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。

(4) 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。

(5)如果黄酮类化合物粗提物中有鞣质,那么你就要小心了,Tandex LH-20对鞣质几乎是死吸附的。如果不考虑填料,可用Tandex LH-20分鞣质。

(6)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来。

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